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Aureobasidin A (AbA) 金擔子素 / 短梗霉素A/酵母單雜交-雙雜交篩選標記
時間:2016-05-18     作者:懋康生物     文章來源:原創作品    

Aureobasidin A (AbA)金擔子素A/短梗霉素A

——Clontech/Takara 酵母菌/真菌轉化實驗選擇性抗生素/酵母單雜交/雙雜交研究

 

搜索關鍵詞:選擇性抗生素;酵母菌轉化系統【釀酒酵母、粟酒裂殖酵母、念珠菌】;真菌轉化系統【構巢曲霉、黑曲霉】;酵母單雜交/雙雜交;AUR1基因;AURA基因;IPAC合成酶;AUR1-C突變基因;

                                                                             



基本描述:

金擔子素A(Aureobasidin A,AbA),也稱為短梗霉素A,一種來源于絲狀真菌Aureobasidium pullulansNo. R106的環酯肽類抗真菌抗生素,在較低濃度(0.1-0.5μg/ml)下即可對酵母菌產生毒性,對該抗生素敏感的真菌包括:釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、構巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(Aspergillusniger.)。金擔子素AbA通過抑制真菌生長所依賴的肌醇磷脂酰神經酰胺合成酶(Inositol phosphorylceramide (IPC) synthase)活性,阻礙神經酰胺到肌醇磷脂酰神經酰胺的合成,導致鞘脂類物質的合成量不足,細胞膜破裂,進而殺死菌株。研究發現,來自釀酒酵母菌的AUR1和構巢曲霉的AURA基因,兩者具有同源性,都能夠編碼IPC合成酶,對這兩種基因的點突變,也都賦予菌株對AbA產生很強的抗性,比如:突變基因AUR1-C。

 

AbA用作選擇性標記的應用和優勢:

1.  酵母轉化研究中,金擔子素A(AbA)是一種非常有效的選擇性標志;

2. 使用上基本不需優化條件,且創造極低背景。AbA抗性是酵母雙雜交研究中理想的報告子,兼容于攜帶相應抗性的酵母單雜交/雙雜交系統,并提供良好的篩選結果。

 

攜帶AbA抗性基因(AUR1-C)的商業化載體:

1. 大腸桿菌-酵母菌穿梭載體/大腸桿菌-曲霉穿梭載體(shuttle vector)

簡單描述:pAUR載體系統包含六種大腸桿菌-酵母菌穿梭載體,每一種特別改造用于釀酒酵母、粟酒裂殖酵母或者構巢曲霉,這些載體都涵蓋一個新型的藥物抗性選擇性標志(金擔子素Aureobasidin A抗性),使得酵母菌或絲狀真菌具有此抗性。

載體                  

貨號         

規格         

特點

pAUR101 DNA

3600

20μg

在酵母細胞內不會自主復制,僅通過重組方法整合進入染色體才能保留在細胞內。染色體整合和釀酒酵母菌轉化用載體。含來自釀酒酵母菌的AbA抗性基因-AUR1-C。大腸桿菌-酵母菌穿梭載體;

pAUR112 DNA

3601

20μg

含CEN/ARS區域,在酵母細胞內能自主復制,因此細胞分裂過程能保持穩定。含AmpR和URA3基因(尿嘧啶選擇性標記),來自釀酒酵母菌的AbA抗性基因-AUR1-C。大腸桿菌-酵母菌穿梭載體;

pAUR123 DNA

3602

20μg

來自釀酒酵母菌的AbA抗性基因-AUR1-C。蛋白表達載體和來源于pAUR112的大腸桿菌-酵母菌穿梭載體;含用于酵母細胞蛋白表達用的ADH1持續性啟動子;

pAUR135 DNA

3604

20μg

Vector for marker removal in S. cerevisiae;大腸桿菌-酵母菌穿梭載體;

pAUR224 DNA

3603

20μg

含來自粟酒裂殖酵母的AbA抗性基因-aur1R;蛋白表達載體,含粟酒裂殖酵母中發揮作用的CMV持續性啟動子;

pAUR316 DNA

3605

20μg

構巢曲霉內能夠自主復制;來自構巢曲霉的AbA抗性基因-aurAr以及AMA1區域(復制起始區)和AmpR;大腸桿菌-曲霉穿梭載體;

 

2. 酵母報告基因載體(yeast reporter vector)

載體名稱                    

特點                                                                                                                                          

備注                

pAbAi Vector

用于單雜交(one-hybrid)實驗的酵母報告載體,可用來鑒定和分類DNA結合蛋白。特別設計兼容于Matchmaker Gold酵母單雜交篩選系統,順式作用元件(靶向序列)可插入MCS用作誘餌以篩選GAL4 AD/cDNA融合文庫;目標蛋白-DNA的相互作用驅動AUR1-C抗性基因表達,從而能篩選到AbA抗性酵母;

Matchmaker Gold酵母單雜交系統

p53-AbAi Vector

酵母報告載體,配合Matchmaker Gold酵母單雜交篩選系統的陽性對照載體;含p53結合序列(順式作用元件);AbA抗性基因AUR1-C的表達受GAL4 AD-p53與p53結合序列的相互作用而誘發;p53-AbAi在酵母細胞內不能游離繁殖,僅當整合進入宿主染色體才可以穩定存在,通過載體上的URA3基因和酵母菌株上的非功能ura3-52 locus發生同源重組以實現整合。另,含Col E1復制起始子和AmpR,可實現大腸桿菌內的擴增和復制。

 

基本特性:

1)  同義名:短梗霉素A

2)  分子式:C60H92N8O11

3)  分子量:1100Da

4)  純度:≥95%

5)  熔點:155-157℃

 6)溶解性:不溶于水,易溶于甲醇、乙醇(0.5-5mg/ml)

    

 

產品訂購:更大訂購或產品技術問題,請來電/在線咨詢,電話:021-54736159 。網站:www.btemplateseo.com。

或直接參考Clontech官網:http://www.clontech.com/CN/Products/Protein_Interactions_and_Profiling/Yeast_Two-Hybrid/Aureobasidin?sitex=10022:22372:US

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產品名稱                                                                 

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價格(元)

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Clontech

630466

Aureobasidin A for Yeast Two-Hybrid Studies

【1mg/ml in methanol特殊包裝,經濟實惠】

1mg

1400

現貨

 

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

 

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