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BL21系列表達感受態細胞常見問題
時間:2018-04-24     作者:懋康原創     文章來源:懋康生物    

BL21系列感受態細胞常見問題

 

以下是我司(懋康生物)整理的BL21系列感受態細胞常見問題,如有更多問題,歡迎在產品頁給我們留言或發郵件到tech@maokangbio.com 。

 

Part 1、BL21/BL21(DE3)/ BL21 (DE3) pLysS感受態細胞

一、BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS菌株和基因型

宿主菌Host Strain

基因型Genotype

BL21 strain

E. coli B F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm

BL21 (DE3) strain

E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)

BL21 (DE3) pLysS strain      

E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3) pLysS (CamR)   

基因型說明:

a)以上三個宿主菌都是大腸桿菌E. Coli. B/r菌株,不含lon蛋白酶,也缺乏外膜蛋白酶OmpT。這兩個關鍵蛋白酶的缺乏降低菌株內表達外源蛋白的降解率。

b)DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體(DE3 lysogen)(其上攜帶lacUV5啟動子調控的T7 RNA聚合酶基因),IPTG能誘導T7 RNA聚合酶的表達。

c)pLysS命名表明該菌株攜帶pLysS質粒,含有表達T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能夠作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,從而能夠降低目的基因的背景表達水平,但不干擾IPTG誘導的表達。pLysS質粒賦予菌株氯霉素抗性(CamR),而且含有p15A復制起始子,這一起始子使該菌株兼容于含ColE1或pMB1復制起始子的質粒(比如pUC或pBR322來源的質粒)。

 

二、BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS菌株的應用特征

BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS三種宿主菌內T7啟動子表達載體(比如pCAL, pET載體)呈現不同的蛋白表達水平。BL21(DE3)感受態細胞是全能型菌株,滿足高水平蛋白表達且容易誘導。BL21 (DE3) pLysS感受態更嚴格控制毒性蛋白表達且具氯霉素抗性。

表達宿主

誘導方法

優點

缺點

BL21

λ噬菌體CE6感染

最嚴格控制背景表達(非誘導表達)

誘導不如DE3衍生菌有效;誘導(感染)過程更冗長

BL21 (DE3)

IPTG誘導lacUV5啟動子驅動的T7聚合酶

高水平表達

T7聚合酶泄露表達,引起潛在毒性蛋白的背景表達(非誘導表達)

BL21 (DE3) pLysS

IPTG誘導的T7聚合酶

容易誘導

與BL21 (DE3)相比,稍微抑制誘導表達

 

三、BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS菌株的異源蛋白表達特征

表達宿主

異源蛋白(Heterologous protein)表達特征

BL21 strain

非毒性蛋白的高水平表達,不能用于T7啟動子驅動的蛋白表達(如pET) 

BL21 (DE3) strain

非毒性蛋白的高水平表達,用于T7啟動子驅動的蛋白表達(如pET)

BL21 (DE3) pLysS strain     

非毒性和毒性蛋白的高水平表達,背景表達低于BL21 (DE3),BL21

 

更多問題持續添加中。。。。。。

 

產品訂購信息:懋康生物感受態細胞促銷活動出來啦,歡迎咨詢。所有感受態細胞都經過實驗室質控轉化效率,用嚴謹的態度做出優秀的產品,并以完善的保存和運輸環節來保證產品的穩定性。歡迎使用我司產品。

貨號

產品名稱

規格

價格(元)  

MF2331-1000UL     

BL21 (DE3) Chemically Competent Cell 化學感受態細胞  

10×100μl    

280

MF2331-5000UL

BL21 (DE3) Chemically Competent Cell 化學感受態細胞

50×100μl

1280

MF2332-1000UL

BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 化學感受態細胞

10×100μl

280

MF2332-5000UL

BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 化學感受態細胞

50×100μl

1280

 

 

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