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結腸癌造模誘導劑(Wako/Sigma)— 偶氮甲烷(Azoxymethane,AOM)
時間:2016-11-05     作者:懋康原創     文章來源:懋康生物    

結腸癌造模誘導劑(Wako/Sigma)

偶氮甲烷(Azoxymethane,AOM)


基本描述:

偶氮甲烷(氧化偶氮甲烷),英文Azoxymethane,縮寫AOM,可有效誘導大小鼠結腸癌,廣泛用作一種基質引起實驗動物發生結腸腫瘤,從而研究癌癥預防物和癌癥形成機制。另外,越來越多結腸癌病例的發生,使得癌癥預防物的研究也越來越流行。按照每周一次皮下注射AOM(15mg/kg體重)進入大鼠體內,連續3周給藥。數周后能觀察到癌前期病變。

 

作用機制:偶氮甲烷(AOM)能誘導DNA產生O6-甲基鳥嘌加合物,導致G→A轉化。

主要應用:偶氮甲烷(AOM)常聯合DSS(Mw:36000-50000 Da)注射動物,建立結腸癌模型,用來研究癌癥發展機制和化學預防。

 

基本特征:

1)  CAS NO. 25843-45-2

2)  線性分子式:CH3N=N(→O)CH3【C2H6N2O】

3)  分子量:74.08

4)  純度:≥98%

5)  結構式:

 

結腸癌(Colon cancer)模型建立案例:

1、  文獻來源:Wirtz S, et al. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. Nat Protoc. 2007; 2(3):541-6.

1.1    DSS溶液制備(2% DSS溶液):溶解10gDSS于500ml無菌的飲用水中,使用前溶液保存在4℃,最好現配現用。

1.2    AOM溶液制備:用無菌水溶解AOM配制10 mg/ml的儲存液,分裝后放到-20℃保存,避免反復凍融。使用之前,融化分裝母液并用無菌生理鹽水1:10倍稀釋。

1.3    小鼠結腸炎相關的依賴性結直腸癌造模方法

1)  第1天稱重和標記小鼠;

2)  按10 mg/kg體重的劑量腹腔注射AOM溶液;

3)  加DSS溶液灌滿小鼠籠內的飲水槽,以5ml DSS溶液/小鼠/天加量,對照小鼠加等體積不含DSS的飲用水;

4)  第3天清空籠子內剩余的DSS飲用水,過兩天重新裝滿DSS溶液;

5)  第5天清空籠子內剩余的DSS飲用水,重新裝滿DSS溶液;

6)  第8天清空籠子內剩余的DSS溶液,換上不含DSS的無菌水持續14天;

7)  第22-26天重復第3)-5)步;

8)  第29天清空籠子內剩余的DSS溶液,換上不含DSS的無菌水持續14天;

9)  第43-47天重復第3)-5)步;

10)第50天清空籠子內剩余的DSS溶液,換上不含DSS的無菌水;


2、文獻來源:Neufert C, et al. An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression. Nat Protoc. 2007; 2(8):1998-2004.

2.1 DSS溶液制備(2.5% DSS溶液):稱取2.5g DSS溶于100ml無菌水,本溶液置于4℃可穩定保存1周。最好現配現用。

2.2 AOM溶液制備:用無菌水溶解AOM配制10 mg/ml的儲存液,分裝后放到-20℃保存,避免反復凍融。AOM在水或生理鹽水中的穩定性高于PBS緩沖液,且在玻璃管內穩定性好于塑料管。使用之前,融化分裝母液并用無菌生理鹽水1:10倍稀釋。


2.3 小鼠結腸癌造模方法

1)第1天稱重,等數分組并標記小鼠;

2)按照10mg/kg體重的濃度計算所需的AOM量,取適量的AOM儲存液(10mg/ml)用無菌生理鹽水1:10倍稀釋。

3)腹腔注射AOM工作液(劑量10mg/kg體重,則10g體重小鼠注射100ul工作液)到實驗組小鼠,同時注射等體積的無菌生理鹽水到對照組小鼠。

4)自此步之后,按照兩種方法繼續實驗。若建立自發性腫瘤進展模型,見方案A;若建立慢性炎癥驅動的腫瘤進展模型,見方案B。

 

方案A,自發性腫瘤進展模型

A1,第8天重復步驟1)-3);

A2,第15天重復步驟1)-3);

A3,第22天重復步驟1)-3);

A4,第29天重復步驟1)-3);

A5,第36天重復步驟1)-3);【到這步每只小鼠都腹腔注射給藥6次】

A6,第一次注射后的3個月評估癌前病變,此時不需處死動物。

A7,第一次注射后的6個月評估腫瘤發展。

 

方案B,慢性炎癥驅動的腫瘤進展(Chronic inflammation-driven tumor progression)

B1,制備2.5%(wt/v)DSS溶液。此濃度的DSS能讓FVB/N小鼠和其他品系產生良好的造模效果。

B2,按3天的用量加DSS溶液灌滿小鼠籠內的飲水槽,以5ml DSS溶液/小鼠/天用量,對照小鼠加等體積不含DSS的飲用水;

B3,第4天清空飲水槽內殘留DSS溶液,并且重新灌滿另2天所需量的新鮮DSS溶液。

B4,第6天清空飲水槽內殘留DSS溶液,并且重新灌滿另2天所需量的新鮮DSS溶液。

B5,第8天清空飲水槽內殘留DSS溶液,并且重新灌滿滅菌水。

B6,第22-29日重復步驟B1)-B5)。

B7,第40日評估癌前病變,此時不需處死動物。

B8,第53-60日重復步驟B1)-B5)。

B9,第80日評估腫瘤發展。


2.4 AOM誘導腫瘤圖示(圖1)


圖1.內窺鏡腫瘤調研。通過迷你腔鏡監測AOM誘導的腫瘤形成情況。a)還能用于縱向研究;b)對于腫瘤負荷分析,每只小鼠的腫瘤大小按照預設的時間點記錄并做總和。


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注意事項

為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

 

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

 

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