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Celltracker CM-DiI/活細胞示蹤劑/ DiI改良探針/紅色熒光
時間:2016-08-15     作者:懋康生物     文章來源:懋康原創    

搜索關鍵詞:細胞膜熒光探針,紅色細胞膜探針DiI,綠色細胞膜探針DiO,DiD,DiR,DiA,CM-DiI,神經示蹤,Life C7000,活細胞體內外示蹤,CAS:180854-97-1

 

CM-DiI基本描述:

CM-DiI(活細胞的多代示蹤、固定細胞長期示蹤)

CellTracker CM-DiI為DiI的衍生物,在DiI中加入了具有中度巰基反應特性的氯甲基取代物,后者能與細胞內含巰基的肽和蛋白結合,使得CM-DiI能夠抵抗醛類的固定作用。CM-DiI在細胞固定、破膜及石蠟包埋的整個過程中均能很好的保留在細胞內,因此,與傳統細胞膜探針DiI相比較,更適于固定后標本的長期示蹤。其紅色/綠色的光譜特征,使其可與綠色探針或者綠色熒光蛋白如GFP一起用于雙標實驗。

 

CellTracker CM-DiI具以下特征:

a)使用方便,只需吸掉培養液,加入探針,30min孵育,顯微成像;

b)熒光信號至少可持續72h以上(一般3-6代),染料只傳到子代細胞,不會染上鄰近細胞。

c)毒性很低,不會影響細胞增殖和活力。

總而言之,CellTracker CM-DiI具有良好的示蹤特征,對細胞無毒,穩定長效,染料很好保留在細胞內,生理pH熒光信號強。

 

研究證實,CM-DiI標記后熒光在胞內表達穩定,陽性標記率達98%以上,標記細胞形態良好,能有效地觀察細胞在體外的誘導分化情況;或將標記的細胞注入體內,可以有效的顯示移植細胞在活體組織中的遷移及分化。

 

CM-DiI(改良探針)與DiI(傳統探針)在透化和非透化處理樣本的效果比較:【來自文獻Staffend NA, et al. DiOlistic labeling of neurons in tissue slices: a qualitative and quantitative analysis of methodological variations.Front Neuroanat. 2011 Mar 1;5:14.】

1、未透化組織DiI&CM-DiI標記完整性的比較

結果顯示【見圖1&圖2】:兩種熒光探針(DiI和CM-DiI)標記組織的全細胞檢測顯示,不管是即刻觀察,還是2周后觀察,染料完整性和圖片質量都保持完整。對于樹突狀片段的結果染色結果一致。另外,通過分析樹突段的突棘密度來調查不同時間周期下染色穩定性和完整性。對于DiI標記的樹突段,不會時間段染色幾乎無差異。然而,CM-DiI標記的樹突段,突棘密度封片2周后明顯增強。

              

圖1(左). 非透化熒光染色組織的全細胞檢測。A)DiI標記組織封片后馬上檢測;B)DiI標記組織封片2周后熒光檢測;C)CM-DiI標記組織封片后馬上檢測;D)CM-DiI標記組織封片2周后熒光檢測;

圖2(右). 非透化熒光染色組織的樹突片段檢測。A)DiI標記組織封片后馬上檢測;B)DiI標記組織封片2周后熒光檢測;C)CM-DiI標記組織封片后馬上檢測;D)CM-DiI標記組織封片2周后熒光檢測;


2、透化組織DiI&CM-DiI標記完整性的比較

結果顯示【見圖3&圖4】:兩種熒光探針(DiI和CM-DiI)標記組織封片后即刻檢測,不論是全細胞還是樹突段,結果都無明顯差異;兩種熒光探針(DiI和CM-DiI)標記組織封片2周后檢測,不論是全細胞還是樹突段,CM-DiI標記的穩定性在熒光信號、光淬滅和最終圖片質量上都強于DiI。

不管是即刻觀察,還是2周后觀察,染料完整性和圖片質量都保持完整。對于樹突狀片段的結果染色結果一致。另外,通過分析樹突段的突棘密度來調查不同時間周期下染色穩定性和完整性。對于DiI標記的樹突段,不會時間段染色幾乎無差異。然而,CM-DiI標記的樹突段,突棘密度封片2周后明顯增強。

               

圖3(左). 透化熒光染色組織的全細胞檢測。A)DiI標記組織封片后馬上檢測;B)DiI標記組織封片2周后熒光檢測;C)CM-DiI標記組織封片后馬上檢測;D)CM-DiI標記組織封片2周后熒光檢測;

圖4(右). 透化熒光染色組織的樹突片段檢測。A)DiI標記組織封片后馬上檢測;B)DiI標記組織封片2周后熒光檢測;C)CM-DiI標記組織封片后馬上檢測;D)CM-DiI標記組織封片2周后熒光檢測;

 

溫馨提示:對于不經透化處理的樣本,只需用傳統的細胞膜熒光探針如DiI染色即可。對于后續需透化處理的樣本,推薦用改良探針如CM-DiI(貨號:MX4007-50UG)進行染色。

 

CM-DiI基本特性:

1)CAS NO:180854-97-1

2)化學名:3H-Indolium, 5-[[[4-(chloromethyl)benzoyl]amino]methyl]-2-[3-(1,3-dihydro-3,3-dimethyl-1- octadecyl-2H-indol-2-ylidene)-1-propenyl]-3,3-dimethyl-1-octadecyl-, chloride

3)分子式:C68H105Cl2N3O

4)分子量:1051.5g/mol

5)  純度:≥95%

6)  外觀:紅色固體

7)  Ex/Em:553/570 nm(甲醇)

8)  推薦濾光器:Omega-XF32, Chroma-31002

9)  溶解性:溶于DMSO,乙醇,DMF

10)化學結構圖:    

 

細胞膜探針光譜和檢測濾片:

熒光探針               

 最大激發/最大發射波長           

(Ex/Em)

濾光片編號

Omeaga公司                         

    Chroma公司                       

DiI

549/565nm

XF108, XF32

41002, 31002

CM-DiI

553/570nm

XF32

31002

DiO

484/501nm

XF100, XF2341001, 31001

41001, 31001

DiD

644/665nm

XF110, XF47

41008, 31023

DiR

750/780nm

XF112

41009

DiA

456/590nm

XF21

31024

 

產品訂購信息:【現貨提供】

貨號                   

產品名稱                                                        

Ex/Em (nm)      

規格              

價格(元)      

MX4007-50UG

Celltracker CM-DiI 活細胞示蹤劑CM-DiI(紅色)

553/570

1×50μg

450.00

MX4007-250UG

Celltracker CM-DiI 活細胞示蹤劑CM-DiI(紅色)

553/570

5×50μg

1845.00

MX4007-500UG

Celltracker CM-DiI 活細胞示蹤劑CM-DiI(紅色)

553/570

10×50μg

3485.00

 

應用文獻:

1.  Hemmrich Ket al,Applicability of the dyes CFSE, CM-DiI and PKH26 for tracking of human preadipocytes to evaluate adipose tissue engineering.Cells Tissues Organs. 2006; 184(3-4):117-27.

2.  Andrade W, et al, The use of the lipophilic fluorochrome CM-DiI for tracking the migration of lymphocytes.J Immunol Methods. 1996 Aug 14;194(2):181-9.

3.  Schatteman GC, et al,Blood-derived angioblasts accelerate blood-flow restoration in diabetic mice.J Clin Invest. 2000 Aug; 106(4):571-8.

4.  Foley-Comer AJ, et al, Evidence for incorporation of free-floating mesothelial cells as a mechanism of serosal healing.J Cell Sci. 2002 Apr 1;115(Pt 7):1383-9.

5.  Djouad F, et al,Immunosuppressive effect of mesenchymal stem cells favors tumor growth in allogeneic animals.Blood. 2003 Nov 15;102(10):3837-44. Epub 2003 Jul 24.

6.  Hosie KA, et al,Chronic excitotoxin-induced axon degeneration in a compartmented neuronal culture model.ASN Neuro. 2012 Feb 23;4(1). pii: e00076. doi: 10.1042/AN20110031.



— — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

 


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