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PEI 40K Transfection Reagent 線性化聚乙烯亞胺轉染試劑
目錄號 MX2205-1ML 售價 280.00元
規格 1ml 運輸溫度 室溫運輸
其他名稱 線性化聚乙烯亞胺 保存溫度 4℃保存
CAS號 49553-93-7 有效期 1年
應用 轉染試劑 訂購數量
產品簡介:

PEI 40K Transfection Reagent

線性化聚乙烯亞胺轉染試劑


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產品標簽

PEI 40K轉染試劑,PEI 25K轉染試劑;線性化聚乙烯亞胺;PEI 40000;PEI25000;Lipofectamine 2000;Lipofectamine 3000;


產品信息

  產品名稱

  產品編號

  規格            

 價格(元)     

 PEI 40K Transfection Reagent  線性化聚乙烯亞胺轉染試劑   

  MX2205-1ML      

  1ml

 280

  MX2205-10ML

  10ml

 880 

  MX2205-50ML

  50ml   

1680 


產品描述

線性化聚乙烯亞胺PEI 40000(Polyethylenimine Linear, MW 40000; PEI 40K)是一款優秀和低成本的瞬時性轉染試劑。在HEK293和CHO表達系統中,PEI在寬廣的生產規模內(從96孔板到100L生物反應器)能提供連續性的高基因表達。

作為線性化聚乙烯亞胺PEI25000(PEI 25K)的升級產品,操作更簡單,且具有連續性的更高表達滴度,優勢在于:1)PEI 25K轉染溶液通常需幾個小時來配置,然而,PEI 40K在2個小時內即可轉化為即用型的溶液;2)PEI 25K含4-11%殘留的丙?;鶊F,該基團阻止聚合物骨架緊密結合到DNA。然而,PEI 40K完全去丙?;Y構,意味著每個批次保持連續性更高轉化效率。

本品是PEI 40K的無菌溶液,濃度為1mg/ml,直接使用即可。1ml本品足以用來轉染250μg DNA,或者,6孔板內約做60-120次轉染。


保存與運輸方法

保存:+4℃保存,1年有效。

運輸:室溫運輸。


注意事項

1)請務必使用高質量的無內毒素質粒。通過260 nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內)。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。

2)使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。

3)對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高重組蛋白的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為60-80%。

4)對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。

5)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


試劑準備

稀釋液準備:用細胞培養級水來制備150mM NaCl(比如:稱取876.6mg高純NaCl加入80ml細胞培養級水,充分溶解后,定容到100ml,經0.1或0.2μm濾膜過濾除菌。)

【注意】:也可使用商業化的無血清培養基(比如Opti-MEM I)來制備轉染復合物。


一、操作方法(貼壁細胞)

1.1鋪板

a)轉染前18-24h進行鋪板,調整合適的細胞密度(參考表1),使其在轉染時細胞密度達60-80%。

【注意】:高血清水平會抑制轉染效率,大多數情況,低血清水平(≤5%)能產生最高的轉染效率。

表1.不同培養器皿的建議接種密度

培養器皿

培養表面積

(cm2)

接種細胞數

培養器皿

培養表面積(cm2)

接種細胞數

96孔板

0.3

(1.2-2.4) ×104

35mm培養皿

9.6

(3.5-7.0) ×105

48孔板

1.0

(4.0-8.0) ×104

60mm培養皿

21

(0.9-1.8) ×106

24孔板

1.9

(0.8-1.6) ×105

100mm培養皿

58

(2.2-4.4) ×106

12孔板

3.5

(1.5-3.0) ×105

T75培養瓶

75

(3.0-6.0) ×106

6孔板

9.6

(4.0-8.0) ×105

T175培養瓶

175

(0.7-1.4) ×107

1.2轉染步驟(以6孔板的單孔為例)

a)轉染前1-2h,每孔替換為3ml含2%血清的新鮮生長培養基。

b)制備PEI 40K-DNA轉染復合物(嚴格按照順序進行):①往300μl稀釋液內加入2μg質粒DNA,低速混合/渦旋均勻;②往混合物內加入8μl PEI 40K(1mg/ml)(DNA/PEI 40K=1:4),低速渦旋5s;③無菌環境,室溫靜置20min以形成PEI 40K-DNA轉染復合物。④用移液槍上下吹打3次,輕輕混勻。

c)將PEI 40K-DNA轉染復合物轉到孔內。輕輕晃動培養皿或輕微渦旋,使得復合物分散均勻。

【注意】:以上步驟可通過調整PEI 40K-DNA復合物在稀釋液內的體積(稀釋液為培養總體積的10%)來進行放大或縮?。蓞⒖急?)。確保DNA/PEI 40K=1:4!

表2. 各種培養體系內轉染用各組分建議用量

培養器皿

培養體積(ml)

質粒DNA(μg)

稀釋液(ml)

PEI 40K(μl)

6孔板,單孔

3

2-4

0.3

8-16

35mm培養皿

3

2-4

0.3

8-16

60mm培養皿

5

6-12

0.5

24-48

100mm培養皿

10

12-24

1.0

48-96

T75培養瓶

15

18-36

1.5

72-144

250ml搖瓶

50

50-100

2.5

200-400

1.3 孵育

a)37℃,5% CO2培養箱內培養細胞,轉染后12-18h,去除含PEI 40K-DNA復合物的培養液,更換新鮮的生長培養基。

b)通常,轉染后36-48h能檢測到重組蛋白表達。一般在轉染后72-96h能觀察到最大水平的表達。


二、操作方法(懸浮細胞)

2.1接種準備

于轉染前2-3h,按照1.0×106/ml培養接種細胞。

2.2 轉染步驟(以:50ml培養物/250ml搖瓶為例)

a)制備PEI 40K-DNA轉染復合物(嚴格按照順序進行):①往2.5ml稀釋液內加入50μg質粒DNA,低速混合/渦旋均勻;②往混合物內加入200μl PEI 40K(1mg/ml)(DNA/PEI 40K=1:4),低速渦旋5s;③無菌環境,室溫靜置20min以形成PEI 40K-DNA轉染復合物。④用移液槍上下吹打3次,輕輕混勻。

b)將全部轉染溶液加入25ml懸浮細胞內。

c)將懸浮細胞放回培養箱內。

2.3 孵育

a)在培養箱內搖動培養2-3h,之后加入25ml新鮮生長培養基。重新放回培養箱。

b)通常,轉染后36-48h能檢測到重組蛋白表達。一般在轉染后72-96h能觀察到最大水平的表達。


相關產品

貨號

名稱

規格             

MX2202-250MG    

Polyethylenimine Linear, MW 25000 線性化聚乙烯亞胺PEI 25000

250mg

MX2203-250MG

Polyethylenimine Linear, MW 40000 (PEI 40K) 線性化聚乙烯亞胺PEI 40000     

250mg

MX2204-1ML

PEI 25K Transfection Reagent 線性化聚乙烯亞胺轉染試劑

1ml

MX2205-1ML

PEI 40K Transfection Reagent 線性化聚乙烯亞胺轉染試劑

1ml

MX2211-0.15ML

Lipo2000 Transfection Reagent Lipo2000脂質體轉染試劑

0.15ml

MX2216-0.5KIT

CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit CPFect小分子RNA轉染試劑盒

0.5kit

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

 

 

      上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

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