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Lipo2000 Transfection Reagent Lipo2000脂質體轉染試劑
目錄號 MX2211-0.15ML 售價 350.00元
規格 0.15ml 運輸溫度 冰袋
其他名稱 保存溫度 4ºC保存
CAS號 N/A 有效期 1年
應用 脂質體轉染試劑 訂購數量
產品簡介:

Lipo2000 Transfection Reagent 脂質體轉染試劑

 

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產品信息

產品名稱

產品編號

規格

價格(元)         

Lipo2000 Transfection Reagent Lipo2000脂質體轉染試劑            

MX2211-0.15ML       

0.15ml         

350

Lipo2000 Transfection Reagent Lipo2000脂質體轉染試劑

MX2211-0.75ML

0.75ml

950

Lipo2000 Transfection Reagent Lipo2000脂質體轉染試劑

MX2211-1.50ML

1.50ml

1650

Lipo2000 Transfection Reagent Lipo2000脂質體轉染試劑

MX2211-7.50ML

7.50ml

5750

 

產品描述

Lipo2000脂質體轉染試劑(Lipo2000 Transfection Reagent)是一款多用途轉染試劑,適用于核酸(DNA、RNA)的轉染,能在絕大多數貼壁和懸浮細胞(哺乳動物細胞系)提供高效轉染。獨特的配方使其能直接加入培養基,血清的存在不會影響轉染效率。轉染后無需去除DNA- Lipo2000復合物或更換培養基,也可根據自身需求在轉染4-6h后更換新鮮培養基。

 

本品以無菌液體形式提供,濃度為1mg/ml。其使用方法和Lipofectamine? 2000 Transfection Reagent基本一致,并且經過對HEK293、HeLa等細胞的轉染測試,轉染效率和Lipofectamine? 2000相當。

通常情況下,對于24孔板的DNA轉染,每次用2μl左右,則1.5mlLipo2000約可轉染750個孔;對于24孔板的siRNA轉染,每次用1μl左右,則1.5mlLipo2000約可轉染1500個孔;

 

保存與運輸方法

保存:+4℃保存,1年有效。切勿凍存。

運輸:冰袋運輸。

 

注意事項

1)使用高純的DNA或RNA有助于獲得較高的轉染效率,內毒素是影響轉染效率高低的重要因素。

2)使用Lipo2000脂質體轉染試劑需確保高細胞密度,建議轉染時細胞密度達90-95%,有助于獲得最高轉染效率和表達水平,且能最小化高轉染活性導致的細胞生長降低影響??赏ㄟ^優化實驗條件來降低細胞密度,但需注意不同實驗間維持一個標準的接種步驟,因轉染效率依賴于細胞培養密度。

 

3)轉染過程中不要添加抗生素到培養基,否則會導致細胞死亡。

4)為了獲得最佳的轉染效率,制備轉染復合物時要求用無血清培養基(比如Opti-MEM I)稀釋DNA和轉染試劑,因血清會影響復合物的形成。其他無血清培養基(比如DMEM)也能用來稀釋DNA和轉染試劑,但轉染效率有可能會降低。另外,需要特別注意某些無血清配方會抑制Lipo2000介導的轉染,比如CD293, SFMII, VP-SFM等。

 

5)初次使用制備復合物時,最好優化DNA(μg)和Lipo2000脂質體轉染試劑(μl)的比例。DNA和Lipo2000的比例,絕大多數細胞系通常推薦1:2-1:3,比如:24孔板內接種0.5-2×105個細胞,使用0.8-1μg DNA和2-3μL Lipo2000。通過調整DNA/ Lipo2000優化轉染效率很有必要。

 

6)Lipo2000脂質體轉染試劑應該在4℃保存,不可凍存。使用后立即蓋好蓋子,避免長時間暴露在空氣中,否則有可能導致脂質體氧化而影響轉染效率。

7)Lipo2000脂質體轉染試劑不能渦旋或離心,宜緩慢晃動混勻。

8)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

轉染步驟(以質粒DNA的24孔板為例)

【注意】:對大多數細胞來說,DNA(μg)和Lipo2000(μl)的比例為1:2~1:3。轉染時高的細胞密度可以得到高的轉染效率和表達水平,并能減少細胞毒性。

 

1. 細胞準備

1)貼壁細胞:轉染前一天,用500 μl不含抗生素的培養基接種細胞,使之在轉染時細胞達90-95%匯合(0.5~2×105 細胞/個孔,24孔板)。

2)懸浮細胞:轉染當天,于準備DNA-Lipo2000復合物之前,用500μl不含抗生素的培養基接種4~8×105細胞即可。

 

2.按照以下體系配制DNA- Lipo2000脂質體轉染試劑復合物:

1)對于每孔細胞,在EP管內分別加入50μl無血清培養基(比如Opti-MEM? I Reduced Serum Medium)和0.8 μg DNA輕柔混勻,制成DNA稀釋液。

2)對于每孔細胞,在EP管內分別加入50μl無血清培養基(比如Opti-MEM? I Reduced Serum Medium)和2.0 μl Lipo2000(注意用前先混勻),輕柔混勻,制成Lipo2000稀釋液,室溫靜置5min?!咀⒁狻浚盒枰?0min內混合稀釋的DNA和Lipo2000,更長的等待時間會降低活性。如果使用DMEM作為稀釋培養基,那必須在5min內混合稀釋的DNA和Lipo2000。  

3)將DNA稀釋液和Lipo2000稀釋液混合(總體積100μl),輕柔混勻,室溫靜置20min, 形成DNA-Lipo2000復合物,這一混合物可能呈渾濁狀態,但不會抑制轉染效率?!咀⒁狻浚篋NA-Lipo2000復合物在室溫下至少可穩定保存5h。

 

3.將上方制備好的DNA-Lipo2000復合物加入接種好的細胞中,將培養板輕輕地前后搖動,使復合物分散均勻?!咀⒁狻浚喝绻跓o血清條件下轉染,使用含血清的正常培養基進行細胞接種。再加入復合物前吸掉培養基,更換為500μl無血清培養基。

4. 37℃,5% CO2培養箱培養24-48h,直至能進行轉基因表達分析,無需去掉復合物或更換培養基。然而,有必要在4-6 h后更換生長培養基,不會降低轉染活性。

 

5.特殊說明

1)對于穩轉細胞株:則在轉染24h后,按照1:10或更高比例接種細胞到新鮮生長培養基。轉染48h后加入篩選培養基。

2)對于懸浮細胞株:在細胞中加入DNA-Lipo2000復合物后,如需要可以4h后加入PMA和/或PHA。比如:對于Jurkat細胞,分別加入PHA-L(終濃度1μg/ml)和PMA(終濃度50ng/ml),可以提高CMV啟動子活性和基因表達。對于K562細胞,只加入PMA(終濃度50ng/ml)足以提高啟動子活性。

 

轉染體系的放大或縮小

對于不同的細胞培養板,Lipo2000、DNA、細胞和培養基的使用量根據培養表面的不同按比例進行調整,具體參考表I。對于自動化、高通量體系,以96孔板形式制備更大的復合物體積。需要注意的是,需要進行快速的96孔板轉染(細胞鋪板和轉染同時進行),直接在平板中制備復合物,然后將細胞懸液加入到復合物內,這樣進一步減少了轉染時間。此種改進步驟經過293-H,293-F,COS-7L和CHO細胞的試驗,同傳統方法相比活性稍低。

 

表I.不同細胞培養容器中轉染時培養基、核酸及Lipo2000用量

養容器

單孔表面積*          

培養基用量

DNA轉染

RNAi轉染

鋪板培養 基用量   

稀釋培養 基用量**       

DNA         

Lipo2000  

siRNA

Lipo200   

96-well

0.3 cm2

100μl

2 × 25 μl

0.2 μg

0.5 μl

5 pmol

0.25 μl

24-well

2 cm2

500μl

2 × 50 μl

0.8 μg

2.0 μl

20 pmol

1.0 μl

12-well

4 cm2

1 ml

2 × 100 μl

1.6 μg

4.0 μl

40 pmol

2.0 μl

6-well

10 cm2

2 ml

2 × 250 μl

4.0 μg

10 μl

100 pmol   

5 μl

60-mm

20 cm2

5 ml

2 × 0.5 ml

8.0 μg

20 μl

200 pmol

10 μl

100-mm

60 cm2

15 ml

2 × 1.5 ml

24 μg

60 μl

600 pmol

30 μl

【*】:不同廠商提供的細胞培養容器表面積可能有所不同。

【**】:稀釋DNA/RNA或Lipo2000所用的無血清培養基用量。

【注意】:該表用量僅供參考,具體用量請根據細胞類型、鋪板密度等其他實驗條件進行優化。

 

附表II  Lipo2000脂質體轉染試劑用于不同細胞轉染用量參考(以96孔板為例)

細胞類型                 

培養基                 

每孔細胞數                

DNA用量                         

Lipo2000用量                  

293H

DMEM

3×104

0.2 μg

0.5 μl

293FT

DMEM

3×104

0.2 μg

0.5 μl

293E

DMEM

3×104

0.2 μg

0.5 μl

293F

DMEM

3×104

0.2 μg

0.5 μl

HeLa

DMEM

2×104

0.3 μg

0.5 μl

HepG2

DMEM

3×104

0.5 μg

0.75 μl

A549

DMEM

2×104

0.3 μg

0.5 μl

COS7

DMEM

1.5×104

0.4 μg

0.5 μl

Caco2

MEM

3.5×104

0.3 μg

0.75 μl

BHK21

MEM

2×104

0.2 μg

0.5 μl

RAW264.7

DMEM

3×104

0.2 μg

0.5 μl

CHO-K1

IMDM+Pro

3×104

0.2 μg

0.5 μl

Sf9

SIM SF

5×104

0.4 μg

0.75 μl

 

 

 

                                                                                  — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

 

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

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