Hypoxyprobe^TM-1 Kit 缺氧探針檢測試劑盒

搜索關鍵詞：

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）；Pimonidazole HCl；缺氧標志物（Hypoxia maker）；Chemicon Inc.；

產品應用：

免疫化學法檢測細胞和組織缺氧情況，包括免疫熒光（IF），免疫過氧化物酶，WB或流式細胞分析（FC）；

試劑盒組分：

試劑盒組分詳細描述：

一、Hypoxyprobe-1

Hypoxyprobe-1是2-硝基咪唑的替代物，其化學名和唯一成分是Pimonidazole hydrochloride（Pimonidazole HCl），分子量為290.8，水溶性為400mM（=116 mg/ml），紫外吸收（324nm）的吸光系數為7020（0.9%生理鹽水）。

Hypoxyprobe-1的粉末和溶液形式皆具化學穩定性。比如，固體形式的Hypoxyprobe-1于柔弱光線下室溫保存2年，UV和HPLC分析法評估無任何降解發生。溶于0.9%生理鹽水的Hypoxyprobe-1，濃度100g/L置于2-8℃保存4.5年，UV和HPLC分析法評估無任何降解發生。

作用機理：缺氧細胞中Pimonidazole被還原后得以活化。這一活化的中間物與蛋白質、多肽和氨基酸中的巰基基團（thiol groups）形成穩定的加合物。Mab1抗體結合這些加合物從而能借由免疫化學法來檢測。

二、MAb1抗體

MAb1是小鼠IgG1單克隆抗體（克隆4.3.11.3），為雜交瘤細胞克隆4.3.11.3表達液過濾除菌后得到的上清液，含60μg/ml MAb1和0.15%疊氮鈉。

感興趣組織可用免疫組化檢測（IHC），冰凍切片或者福爾馬林固定的石蠟包埋切片；也可組織降解后用流式分析法檢測；或用WB檢測。典型情況下，MAb1抗體經1:50稀釋后，取100μl到組織切片上。然后加合適的二抗方法來檢測Pimonidazole加合物。

使用指南：

1、 Animal Studies 動物研究

研究正?；蚰[瘤組織缺氧首先通過靜脈注射（intravenous infusion）、腹腔注射（intraperitoneal injection）或口服（oral ingestion）法給Hypoxyprobe-1溶液，劑量為60mg/kg體重。比如，25g小鼠的探針用量為1.5mg/只小鼠。（高達400mg/kg的劑量用于小鼠無可見毒性或引起組織缺氧變化，但60mg/kg以最低成本給予良好的染色結果）。

給藥后，Hypoxyprobe-1分布到包括大腦的所有組織，且僅僅在氧濃度≤14μM（相當于pO2=10mm Hg，37℃）的細胞內與蛋白質巰基形成加合物。除了腫瘤之外，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚含pO2等于或低于10mm Hg的細胞，也會結合Hypoxyprobe-1。

2、Tissue cultures 組織培養

通常情況下，細胞懸液置于含100-200μM Hypoxyprobe-1的缺氧環境中孵育1-2h。之后細胞離心涂片、固定、MAb1和顯色或熒光二抗染色。

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文件下載：

1、HP1-Hypoxyprobe?-1 Kit 操作手冊

2、Hypoxyprobe frequently asked questions (FAQ) 常見問題

3、Hypoxyprobe Kit Application 應用文獻

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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