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SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in DMSO, 電泳級) 核酸凝膠染料
目錄號 MF0751-100UL 售價 650.00元
規格 100µl 運輸溫度 冰袋
其他名稱 保存溫度 -20°C避光干燥保存
CAS號 / 有效期 1年
應用 核酸染料 訂購數量
產品簡介:

SYBR Green I (10,000×in DMSO) 核酸凝膠染料


產品標簽

GoldView;Acridine Orange 吖啶橙;GelRed;DuRed;GelGreen;溴化乙錠(EB);SYBR Green I;


產品信息

產品名稱                                                                  

產品編號            

規格            

價格(元)     

促銷(元

SYBR Green I (10,000× in DMSO) 核酸凝膠染料

MF0751-100UL

100μl

780

650

SYBR Green I (10,000× in DMSO )核酸凝膠染料

MF0751-500UL

500μl

2950

2655
SYBR Green I (10,000× in DMSO )核酸凝膠染
MF0751-1ML
1ml 4750 4250


產品描述

SYBR Green I,是目前檢測瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠中dsDNA最靈敏的染料之一,最低檢出限為20pg DNA(254nm紫外發射光),60pg DNA(300nm透射光);還可用于寡核苷酸檢測(1-2ng,300nm透射光),比溴化乙錠EB的靈敏度高50-100倍。


SYBR Green I檢測凝膠中核酸的非凡靈敏度歸因其獨特的染料特性:①SYBR Green I具有超強的DNA結合力,與DNA結合后熒光顯著增強—至少比EB高出一個數量級;②DNA/SYBR Green I復合物的熒光量子產率(~0.8)比DNA/EB(~0.15)高5倍多;③SYBR Green I在瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中迅速滲透,在缺乏DNA時背景熒光可忽略,讓染色步驟快速,且成像之前無需脫色。


SYBR Green I因與DNA結合能力強,既能在電泳前(預染),也能在電泳后(后染)對DNA進行染色。還可對毛細管電泳分離的DNA進行染色。SYBR Green I與DNA的結合不會抑制多種常見的限制性內切酶活性,包括Hind III和EcoR I,可直接進行消化或連接。用于瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA后,還可直接將DNA轉移到膜上,進行后續的核酸印跡雜交分析。


本品為溶于DMSO的10,000×的SYBR Green I核酸染料,電泳級。


保存與運輸方法

保存:-20°C避光干燥保存,1年有效。

運輸:冰袋運輸。


注意事項

1. 獨立實驗室進行的艾姆斯試驗表明SYBR Green I的致突變性明顯比EB要低很多。但是,必須警告用戶注意,目前尚無關于SYBR Green I對人體的致突變性或毒性的數據。由于該染料與核酸結合,應當被看作潛在誘變劑,使用時要小心謹慎。在處理DMSO儲存液時應特別小心,因DMSO能促進有機分子進入組織。染料的廢棄處理應當符合當地的規定。

2. SYBR Green I對dsDNA的檢測靈敏度非常高(20pg,254nm紫外發射光),但對ssDNA和RNA的靈敏度稍低(100-300pg,254nm紫外發射光),使之成為復雜溶液中檢測dsDNA的理想選擇。尤其是復雜溶液中的ssDNA和RNA可能會掩蓋結果的時候,如凋亡特有的連續梯度條帶apoptosis ladders。

3. SYBR Green I的最大激發波長為497nm,但在~290nm和~380nm處有二級激發峰。與DNA結合的SYBR Green I的熒光發射集中在520nm。這些光譜特性讓SYBR Green I適用于多種凝膠檢測儀,從紫外反射(上紫外)和透射儀(下紫外)到氬離子激光器和水銀燈激發的凝膠掃描儀。

4. 預染色方法,電泳時間不要超過2h,否則SYBR Green I會從DNA上脫離出來,產生彌散狀條帶。

5. 紫外照射透視下,與dsDNA結合的SYBR Green I呈綠色熒光。如果膠中含ssDNA,則熒光顏色為橘黃色而不是綠色。

6. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


使用方法

一、使用前準備工作

使用前將本品取出并回溫至室溫,使DMSO徹底解凍、溶液均一。于離心機上短暫離心確保所有溶液到管底。第一次使用時可將本品分裝成多個小份后凍存,小份染料能更快溶解。


二、染色方法

1.電泳后的DNA染色(后染)

1)在瓊脂糖或非變性聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳。

【注】:TBE和TAE緩沖液均適合于SYBR Green I染色。

2)用TE、TAE或TBE緩沖液將SYBR Green I儲存液進行1:10,000倍稀釋。

【注】:

①SYBR Green I染色對pH敏感,為獲得最佳的靈敏度,應確認在染色溫度下染色液的pH值在7.5- 8.0之間(pH8.0更佳)。

②用水配制的染色液不如用緩沖液配制的穩定,為確保最大的染色靈敏度,必須在24h內使用。此外,用pH低于7.5或高于8.0的緩沖液配制的染色液也不太穩定,染色效率有所下降。

3)染液要充分覆蓋凝膠,室溫輕搖孵育10-40min。

【注】:

①推薦用塑料而不是玻璃容器來儲存染色液,因染料會吸附到玻璃表面。

②染色過程避光進行,建議在容器上加蓋鋁箔或置于暗處。

③凝膠厚度及瓊脂糖或聚丙烯酰胺的比例不同,染色時間將有所不同。

④無需脫色。

⑤染色液可置暗處(最好是冷藏)放置1周或更久,重復使用最多4次。


2.電泳前的DNA染色(預染)

1)配制成SYBR Green I預制凝膠

臨灌膠前將SYBR Green I儲存液按照1:10,000倍稀釋到凝膠溶液中,預制成含有SYBR Green I染料的瓊脂糖或非變性聚丙烯酰胺凝膠。電泳結束后即可在適合的凝膠成像儀下檢測?!绢A染推薦用此法】

預制的SYBR Green I凝膠的DNA檢測下限(大約為30-40pg/條帶),可能略高于電泳后染色(<20pg/條帶)。此外,在SYBR Green I凝膠中的DNA片段遷移率明顯比無染料凝膠中的相同片段慢。


2)作為DNA模板預染標記

一般而言,DNA在電泳前與染料工作液(1:10,000倍稀釋)至少孵育15min。


三、凝膠成像(紫外或藍光透射儀或紫外頂置光源直射)

可在紫外或藍光光源下輕松觀察到用SYBR Green I染色的DNA。


四、從dsDNA中去除SYBR Green I

使用簡單的乙醇沉淀能從dsDNA中去除99%以上的SYBR Green I染料。

將SYBR Green I染色的DNA移至100mM NaCl,加入2.5倍體積的無水或95%的乙醇。在冰上孵育約20min,4℃離心至少10min。去除乙醇,并用70%乙醇洗滌沉淀。讓乙醇揮發,并用TE重懸雙鏈DNA。


 

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】



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