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Fluo-5N AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針
目錄號 MX4562-100UG 售價 1250.00元
規格 2×50μg 運輸溫度 冰袋
其他名稱 Fluo-5N, Acetoxymethyl Ester; 保存溫度 -20℃干燥避光保存
CAS號 N/A 有效期 1年
應用 鈣離子探針 訂購數量
產品簡介:

Fluo-5N AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針

 

搜索關鍵詞:

Fluo-5N AM;Fluo-5F AM;Fluo-4, AM;可見光激發波長Ca2+熒光探針;Fluo-4;

 

產品信息:

產品名稱

產品編號              

規格               

價格(元)      

Fluo-5N AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針   

MX4562-500UG

10×50μg

3250
Fluo-5N AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針
MX4562-100UG
2×50ug 1250

 

基本介紹:

Fluo-5N是Fluo-4的結構類似物,具更低的鈣結合親和力,使其非常適用于鈣水平在1μM~1mM區間內的胞內鈣離子檢測,而Fluo-3和Fluo-4在這個區間內的鈣離子反應達到飽和。Fluo-5N與氬離子激光器的488nm激發光兼容,使其適用于共聚焦顯微鏡、流式細胞儀、熒光酶標儀等儀器。激發和發射波長分別是494和516nm。一旦與鈣離子結合,熒光強度增加大于100倍,波長遷移非常少。

Fluo-5NAM是Fluo-5N的一種乙酰甲酯衍生物,具有細胞膜滲透性,只需簡單培養,即可輕易進入細胞。


產品特性

1)同義名:Fluo-5N, Acetoxymethyl Ester;

2)分子式:C50H47F2N3O25

3)分子量:1127.92

4)Ex/Em:494/516nm(Ca2+-bound)

5)解離常數:~90μM

6)純度:≥95% (HPLC)

7)溶解性:溶于DMSO(5mM)

8)化學結構式:


保存與運輸方法

保存:-20℃干燥避光保存,有效期至少1年。

運輸:冰袋運輸。


注意事項

1)  熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

2)  乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮,冰箱取出后請在干燥的環境放至室溫后再開封。由于試劑微量,開封前請將其短暫離心,以保證粉末落入管底。

3)  Fluo-5NAM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內,可在20-25℃溫育片刻至全部融解后使用。

4)  Fluo-5NAM第一次使用,建議儲存液現配現用,分裝成單次用量,嚴格做到≤-20℃密封干燥凍存,以防止受潮。為了保證良好的實驗效果,盡量在短時間內使用。

5)  為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


使用方法

A,  試劑準備

1)  配制Pluronic F-127母液:稱取100mgPluronic F-127粉末(貨號:MS4301-1G)中加入500μl DMSO,配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存,不用冷藏。如有結晶析出,可以重新加熱后溶解,不影響使用。

2)  HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2)或者其他生理緩沖液


B,操作步驟

1)  用無水DMSO溶解Fluo-5NAM配制成2-5mM的儲存液,或將已配好的Fluo-5NAM儲存液取出于室溫回溫。(如:若配制成4mM的母液,需向50μg Fluo-5NAM中加入11μl無水DMSO)。準備Fluo-5NAM工作液之前,有時需要往Fluo-5NAM儲存液中加入適量的20% Pluronic F-127溶液,以增強AM探針的水溶性。

【注①】:Fluo-5N AM染色工作液制備前,添加一定體積的20% Pluronic F-127溶液到Fluo-5NAM+ DMSO儲存液,從而使Pluronic F-127的最終工作濃度約為0.02%。

【注②】:

2)  用HHBS或其他生理緩沖液(含鈣鎂)將Fluo-5NAM+DMSO儲存液稀釋到1-20μM的工作液。

【注①】:Fluo-5N AM應用在大部分細胞的推薦加載濃度為4-5μM,具體的使用濃度需根據實驗要求進行優化。為了避免過度加載造成細胞毒性,建議在取得有效結果的基礎上盡量使用最低探針濃度。

【注②】:

3)  【可選】如果細胞內(比如CHO細胞)含有機陰離子轉運體,丙磺舒(Probenecid,1-2.5mM)或磺吡酮(Sulfinpyrazone,0.1-0.25mM)可能需要加入細胞培養基內,以降低去酯化探針的泄露水平。

4)  將準備好的Fluo-5NAM染色工作液加入細胞,加入量以覆蓋細胞為準。室溫或37℃孵育20-120min。

【注①】:若使用含血清的培養基,血清內酯酶會降解AM,從而降低Fluo-5NAM加載效果。而含酚紅培養基會使本底值略偏高,建議加入染色工作液前,對細胞清洗2~3次。

【注②】:

【注③】:

5)  吸掉染色工作液,并用HHBS或其他生理緩沖液(如有必要,使用含轉運體抑制劑如1mM丙磺舒的緩沖液)清洗細胞1~2次,以去除殘留探針。

6)  室溫再孵育30min以保證細胞內AM的完全去酯化。

7)  用合適的激發/發射波長來檢測熒光(見附錄I:Fluo-5N的激發和發射光譜)


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貨號

名稱

規格             

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500μg


附錄I Fluo-5N的激發和發射光譜

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】


上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

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