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CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit CPFect小分子RNA轉染試劑盒
目錄號 MX2216-0.5KIT 售價 1580.00元
規格 0.5kit 運輸溫度 室溫運輸
其他名稱 保存溫度 4℃保存
CAS號 N/A 有效期 1年
應用 訂購數量
產品簡介:

CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit

CPFect小分子RNA轉染試劑盒

產品信息

產品名稱

產品編號

規格

價格(元)

   CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit

      CPFect小分子RNA轉染試劑盒

    MX2216-0.5KIT  

0.5kit

1580

MX2216-1KIT

1kit

2950

產品描述

CPFect小分子RNA轉染試劑盒CPFect siRNA/miRNA Transfection Kit)是一款專門開發用于小分子RNA(比如siRNA、miRNA)的轉染試劑盒,含有轉染所需的轉染試劑,以及轉染緩沖液。本品具極好的生物相容性、轉染效率高、細胞毒性小。轉染時無需進行培養基更換操作,特別適合各種高通量細胞篩選實驗、方便、快速、高效。

試劑盒組分

組分編號

組分名稱

貨號(規格

MX2216-0.5KIT

MX2216-1KIT

MX2216-A

CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagent

0.5ml

2×0.5ml

MX2216-B

10× CPFect Transfection Buffer

0.5ml

2×0.5ml

保存與運輸方法

保存:+4℃保存,1年有效。

運輸:室溫運輸。

注意事項

1)使用高純的DNARNA有助于獲得較高的轉染效率,內毒素是影響轉染效率高低的重要因素。

2轉染過程中不要添加抗生素到培養基,否則會導致細胞死亡。

3CPFect siRNA/miRNA Transfection ReagentMX2216-A應該在4℃保存,不可凍存。

4)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、準備工作

1.1 從冰箱內取出 CPFect siRNA/miRNA Transfection ReagentMX2216-A后,在漩渦振蕩器中充分振蕩后,室溫放置,使之恢復到室溫后使用。

1.2 從冰箱內取出10× CPFect Transfection BufferMX2216-B后,取適量按照19的比例用PBS稀釋到,混勻后待用。

二、轉染方法(以24孔板內轉染siRNA為例)

2.1 接種細胞

a. 貼壁細胞(以HeLa細胞為例):轉染前一天,接種1×105~5×105個細胞至含有適量完全培養基的24孔板培養孔中,使轉染時的細胞密度能夠達到30~50%。

b. 懸浮細胞(以THP-1細胞為例):接種1×105~5×105個細胞至含有適量完全培養基的24孔板培養孔中。

【注意】:

1)不同細胞生長速度不同,接種細胞的數量,細胞密度需要依據細胞類型、培養時間、實驗目的而定;

2)每孔接種的細胞數量盡量相同,使細胞均勻分布。

3)由于自身特性問題,懸浮細胞相對較難轉染,需要優化條件以提高轉染效率,如遇細胞特殊,可更換為電轉方式。

 

2.2 轉染步驟

對于每個轉染樣品,請按以下步驟準備:

a. 稀釋 siRNA 30μl 1×CPFect Transfection Bufferv2)稀釋 1.25μl 20μM siRNA 儲存液(v3),輕輕混勻,室溫孵育 5min。

b. 混合液制備:加入 3μl CPFect siRNA/miRNA Transfection Reagentv4),輕輕吹打混勻,室溫孵育 015min,制備成轉染復合物。

【注意】:

1)請不要振蕩,溶液可能會有渾濁,但不會影響轉染;

2)混合液可室溫放置一段時間,但不宜超過 24h。

c. CPFect轉染復合物加入到適量無雙抗完全培養基(v1)中,輕輕混勻。

【注意】:CPFect轉染復合物加入原細胞培養基中一般無需移除或更換。但也可依具體實驗情況進行優化。 d. (可選)進行其他必要的特殊處理(如加藥處理) ;

e. 將培養板置于 37℃、CO2培養箱中培養24~96h(培養時間與實驗目的相關)。

 

2.3 效果檢測

轉染完成后 24~72小時均可進行siRNA沉默效果檢測,最佳檢測時間與細胞類型,轉染試劑,檢測目的等相關。

1RNA水平的檢測(RNAi沉默鑒定標準):siRNA作用的目標分子是目的基因的RNA,在RISC系統的作用下剪切目標RNA,故檢測目的基因的RNA水平可直接反應siRNA是否發揮相應作用,且通過qRT-PCR可計算具體的抑制效率。一般siRNA轉染后 24~72h即可檢測到目的基因RNA表達明顯降低。

【注意】:引物設計質量很重要,需要確保檢測引物有效性。

2)蛋白水平的檢測:對于蛋白編碼基因,還需檢測相應的蛋白表達水平,以確定是否目的蛋白也成功下調。由于蛋白表達水平的變化受多個因素影響,有時候會出現RNA水平成功抑制了而蛋白水平變化不明顯的情況。若蛋白表達水平下降不明顯,需認真檢測其mRNA的表達水平,用來判斷RNAi不理想的原因。

3)功能篩選:應用 BrdUEdU細胞增殖,細胞凋亡等方法進行siRNA對細胞功能的直接篩選。

 

轉染體系的調整參考用表

I. 不同細胞培養容器轉染時培養基、核酸及轉染試劑用量

 

siRNA終濃度

單孔體積

培養基(v1

Bufferv2

siRNAv3

Reagent (v 4)

96-well

100nM

100μl

92.90μl

6μl

0.5μl

0.6μl

50nM

100μl

93.15μl

6μl

0.25μl

0.6μl

30nM

100μl

93.25μl

6μl

0.15μl

0.6μl

20nM

100μl

93.30μl

6μl

0.1μl

0.6μl

10nM

100μl

93.35μl

6μl

0.05μl

0.6μl

24-well

100nM

500μl

464.50μl

30μl

2.5μl

3μl

50nM *

500μl

465.75μl

30μl

1.25μl

3μl

30nM

500μl

466.25μl

30μl

0.75μl

3μl

20nM

500μl

466.50μl

30μl

0.5μl

3μl

10nM

500μl

466.75μl

30μl

0.25μl

3μl

12-well

100nM

1ml

929.00μl

60μl

5μl

6μl

50nM

1ml

931.50μl

60μl

2.5μl

6μl

30nM

1ml

932.50μl

60μl

1.5μl

6μl

20nM

1ml

933.00μl

60μl

1μl

6μl

10nM

1ml

933.50μl

60μl

0.5μl

6μl

6-well

100nM

2ml

1858.00μl

120μl

10μl

12μl

50nM

2ml

1863.00μl

120μl

5μl

12μl

30nM

2ml

1865.00μl

120μl

3μl

12μl

20nM

2ml

1866.00μl

120μl

2μl

12μl

10nM

2ml

1867.00μl

120μl

1μl

12μl

*】:實際參考用量示例,對于部分細胞類型需進一步優化。

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承以人為本,以誠為信、合同守信的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

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